DNAを長期保存する標本の作製手法について、ご紹介いたします。(現在、昆虫標本について開発済み)

※1 掲載された情報をご利用いただいた結果、ご利用者に損害等が発生したとしても、当方が一切責任を負うものではありませんのでご了承ください。

※2 本手法では少なくとも1500bp程度のDNAは保持可能です。ゲノムDNAを完璧に保存される際には、やはり冷凍保存が最適です。詳しくはTIP3をご参照ください。

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​必要な物品・試薬

・昆虫針や平均台、ピンセットなど、通常の標本作製に必要な物品

・99%プロピレングリコール

・0.2mlチューブ (PCR用チューブ)

・パラフィルム

・スポイト

・アルミホイル

※プロピレングリコール、0.2mlチューブ、パラフィルムなどは通販 (モノタロウなど) で入手可能。

 

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​殺虫方法

1．酢酸エチルの蒸気で殺虫 (密閉できるビンにティッシュ数枚と酢酸エチル数滴を入れ、昆虫を入れておく)。もしくは冷凍庫で数時間保管。酢酸エチルで殺虫する場合、できる限り殺虫時間を短時間とする。また殺虫中、温度が高くなりすぎないようにする。殺虫後、なるべく早くDNAサンプル作製作業に移る。

 

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​標本作製・保管方法

1．殺虫を確認後、昆虫から筋肉組織 (脚部や胸筋など) を切り取る。切り取る際、毎回ピンセットを洗っておく (標本間でDNAが混ざるのを防ぐため)。

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2．切り取った筋肉組織を、99%プロピレングリコールとともに0.2mlチューブに保管する。プロピレングリコールの扱いの際にはスポイトが便利。筋肉組織が大きい場合、脱水のために一度99%プロピレングリコールを入れ替えておく (水分があるとDNAが劣化するため)。

 

※1 プロピレングリコールの液漏れや蒸発防止のため、チューブの蓋をパラフィルムで巻いておく。

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※2 紫外線によるプロピレングリコールの劣化や、万が一の衝撃によるチューブの散逸を防ぐためにアルミホイルを巻いて遮光するとよい。

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3．チューブの蝶番に昆虫針を刺し、昆虫の乾燥標本とともに保管。ドイツ箱で常温保管でよい。

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4．蝶番による固定が弱く、チューブが回転する場合、追加の昆虫針で適宜固定しておく。

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標本DNAサンプル用ラベルの作成

DNAサンプルの作り方によっては劣化の恐れがある。DNAの劣化の程度を推測するため、以下の内容を記載したラベルを作っておくとよい(適宜英語も表記)。

・殺虫~保存までの方法と年月日

・保存液の種類と濃度

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DNA抽出時の注意点

​1．DNAを抽出する際には、チューブから筋肉組織を取り出し、別のチューブに移す。99%エタノールで筋肉組織を1-2度洗浄してプロピレングリコールを除去する。エタノールが蒸発すると、通常のDNA抽出に利用可能。

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